外周血單個(gè)核細(xì)胞分離及冷凍保存

細(xì)胞分離：

外周血用電動(dòng)助吸器按照每管不多于35ml，平均分至50ml離心管中，931×g，離心8min，吸取上層血漿至50ml離心管中，取1.5ml于EP管中，標(biāo)記，－80℃保存。用NA稀釋血細(xì)胞，使得血細(xì)胞:NA為1：1，混勻后均勻緩慢地加至相應(yīng)的A液上層，形成完整的界面。596×g，離心20min。可見明顯分層。吸棄第1層上清，小心輕柔地將第2層的白色細(xì)胞層分別吸至不同的潔凈50ml離心管中。分別向各管中加NA，稀釋混勻，定容至40ml/管。931×g，離心8min。吸棄上清，加NA重懸細(xì)胞。凍存處理前留取細(xì)胞懸液計(jì)數(shù)和活力測(cè)定。

細(xì)胞冷凍保存

純化后細(xì)胞重懸于含終濃度9.8%的等體積DMSO2ml和右旋糖苷的冷凍保存液中，冷凍保護(hù)液配置成2組（1組含80%的無血清培養(yǎng)液，另1組含80%自體血漿）輕輕混勻后置－20℃冰箱冷卻平衡5－15min到4℃以下，同時(shí)把凍存管放4℃冰箱平衡15min。分裝入2ml凍存管內(nèi)，每管1ml，管壁做好標(biāo)識(shí)。放在樣本凍存盒，轉(zhuǎn)移至程序降溫盒儀器，終將細(xì)胞保存于－196℃液氮內(nèi)。