液氮保存對瓣膜細胞活性及組織結構影響

目的：液氮保存對瓣膜細胞活性及組織結構影響，為大限度地保存瓣的生物活性和組織結構完整性提供實驗數據。

方法：本實驗以6只豬的主動脈瓣和肺動脈瓣為研究對象。每個瓣葉被分成2份，每只動脈瓣提供6個瓣葉片，隨機分到6個主動脈瓣或肺動脈瓣組，每組6個瓣葉片(n=6)。6個肺動脈瓣組在含不同抗生素的DMEM液中，于不同溫度下浸泡6h或24h。6個主動脈瓣組經抗菌處理，并用速度控制降溫容器或-20℃和-80℃的低溫冰箱梯度降溫后，在液氮中冷凍保存1、3月。應用XTT比色法測定瓣膜細胞活性，并結合光鏡、透射電鏡。

結果：液氮保存后瓣膜細胞活性明顯下降(P<0.05)，內皮細胞脫落，成纖維細胞不可逆變性增加，細胞外基質纖維連接蛋白與硫酸軟骨素不同程度流失，間質膠原纖維排列紊亂，但膠原橫紋結構仍較清晰。冷凍保存1月與3月，結果無顯著性差異。速度控制降溫容器組的瓣膜細胞活性和細胞超微結構、細胞外基質的完整性均好于-20℃和-80℃的低溫冰箱中各過度2小時降溫組。再次冷凍保存后，瓣膜活性和組織結構損害進一步加重，在保存液中加青、鏈霉素對瓣膜活性和組織結構無明顯影響。

結論：液氮冷凍保存將損害瓣膜的細胞活性和組織結構完整性，但在冷凍時間<3月時，損害的程度與凍存時間無明顯關系;速度控制降溫容器可用于同種瓣冷凍保存的梯度降溫。冷凍保存的同種瓣一經解凍融化，不宜再次冷凍保存后使用;在保存液中加入青、鏈霉素并不加重瓣膜的損害。