免疫治療技術(shù)手段

自體T淋巴細(xì)胞免疫治療已列為正式臨床治療項(xiàng)目，T細(xì)胞的體外誘導(dǎo)及免疫治療技術(shù)已趨于成熟，并取得良好的臨床療效，然而成功有效的過(guò)繼性免疫治療關(guān)鍵在于獲得足量、高活性的免疫效應(yīng)細(xì)胞。免疫治療成功的關(guān)鍵之一是要獲得足夠數(shù)量和質(zhì)量良好的T細(xì)胞。因腫瘤病人往往免疫系統(tǒng)受抑，取自患者的PBMNC。氣相液氮罐

在數(shù)量和質(zhì)量上給體外擴(kuò)增免疫效應(yīng)細(xì)胞帶來(lái)了困難，這是目前臨床上常見(jiàn)的現(xiàn)象，影響了療效。免疫細(xì)胞需多次輸注才能達(dá)到較好的治療效果，多數(shù)醫(yī)療單位利用血細(xì)胞分離機(jī)采集單個(gè)核細(xì)胞，而這種采集方法價(jià)格昂貴，多次采集給患者帶來(lái)心理及身體的痛苦。氣相液氮罐

在免疫細(xì)胞療法技術(shù)成熟的今日，如果能預(yù)先儲(chǔ)存健康的免疫細(xì)胞，在日后有需要時(shí)加以應(yīng)用，不但可以實(shí)踐疾病預(yù)防的概念，更能提升預(yù)防醫(yī)學(xué)的價(jià)值。PBMNC分離和凍存流程既是一種經(jīng)濟(jì)實(shí)用的獨(dú)立操作方法。Ficoll是人工分離淋巴細(xì)胞的重要環(huán)節(jié)，選用高質(zhì)量的試劑可使細(xì)胞分層集中而清晰，能獲取純凈的PBMNC。經(jīng)深低溫長(zhǎng)期保存的PBMNC可以保持其原有的活性，其中T淋巴細(xì)胞的增殖能力未受明顯影響。
凍存前細(xì)胞活力達(dá)到99.6（±0.4%）%，淋巴細(xì)胞回收率58.4%（±6.52%），符合臨床T細(xì)胞的體外誘導(dǎo)及培養(yǎng)的要求。含10%DMSO和右旋糖酐的凍存保護(hù)液中分別添加80%無(wú)血清培養(yǎng)液和80%自體血漿均顯示出良好的冷凍保護(hù)效果，在－196℃液氮中保存其2年仍能夠保持89.7%±3.82%的活力，為下一步臨床擇機(jī)實(shí)施抗腫瘤免疫效應(yīng)細(xì)胞的誘導(dǎo)、擴(kuò)增以及回輸治療提供了便利條件。建立的自體血漿冷凍保護(hù)流程亦適合凍存經(jīng)誘導(dǎo)、擴(kuò)增后的免疫效應(yīng)細(xì)胞，證實(shí)使用冷凍過(guò)的外周血單個(gè)核細(xì)胞能夠定向誘導(dǎo)生成AIL細(xì)胞，并且其擴(kuò)增能力、細(xì)胞純度和細(xì)胞毒活性均與新鮮細(xì)胞直接誘導(dǎo)生成的AIL細(xì)胞沒(méi)有明顯的差別。冷凍的外周血單個(gè)核細(xì)胞誘導(dǎo)的AIL細(xì)胞應(yīng)用于臨床腫瘤治療提供了基礎(chǔ)，可根據(jù)腫瘤患者的治療方案隨時(shí)復(fù)蘇細(xì)胞，使現(xiàn)有的抗腫瘤免疫治療方法更加靈活多變。